温度依赖性 TRPM8 药理学的应用研究

我们在最.新的应用报告中展示了一种基于HEK293细胞的TRPM8通道稳健检测体系，可在Sophion三大自动膜片钳（APC）平台——QPatch Compact、QPatch与Qube 384上稳定运行。该检测体系能够可靠测量TRPM8的内向与外向电流，并清晰体现激动剂与拮抗剂的温度依赖性调控。

前言

TRPM8是一种温度敏感型离子通道，属于TRP（瞬时受体电位）通道家族。它是人体中主要的冷温度和薄荷醇感受器，主要表达于背根神经节和三叉神经节的感觉神经元中。该通道属于非选择性阳离子通道，主要传导钙离子（Ca²⁺）和钠离子（Na⁺）。

TRPM8在疼痛调控中具有复杂作用，尤其与冷性痛觉过敏（即对冷刺激产生疼痛反应）有关。研究表明，该通道的过度表达与前列腺癌、乳腺癌及胰腺癌等多种肿瘤相关，可影响细胞的增殖、迁移和生存。此外，TRPM8还可能参与膀胱功能障碍和干眼症的发病过程，通过调节泪液分泌发挥作用。

由于其在多种疾病中的复杂生理功能，TRPM8被认为是潜在的重要治疗靶点。

结果

图1：外消旋薄荷醇（Racemic menthol, RM）激活TRPM8通道

该图展示了在QPatch系统上，随着外消旋薄荷醇（RM）浓度增加，TRPM8电流（特别是外向电流）显著增强的过程。图中包含不同温度下（27°C与18°C）的浓度–反应曲线比较。TRPM8对薄荷醇表现出典型的剂量依赖性激活特征。在低温（18°C）下，薄荷醇的激活效力更高（即EC₅₀值更低），说明温度可显著增强TRPM8对化学激动剂的敏感性。

表1：外消旋薄荷醇激活TRPM8的logEC₅₀值

降低温度（27°C→18°C）使外消旋薄荷醇的EC₅₀值下降（效力增强），说明TRPM8激活的温度依赖性增强。

图2：(–)-薄荷醇激活的TRPM8内向电流的温度依赖性

图中显示在Qube 384系统上，使用100µM(–)-薄荷醇激活TRPM8通道后，在不同温度下（27°Cvs18°C）产生的内向电流轨迹。电流密度在较低温度下明显更高。TRPM8在(–)-薄荷醇作用下被显著激活，产生强内向电流。降低温度（从27°C到18°C）显著增强电流幅度，表明TRPM8的激活具有明显的温度依赖性。电流稳定性良好，重复性高，验证了Qube 384平台可实现对温敏离子通道的高通量测定。

图3：Icilin激活TRPM8通道的温度依赖性

图示在Qube 384平台上，通过应用Icilin（超强TRPM8激动剂）诱导TRPM8电流激活。图中展示了不同浓度的Icilin对外向电流的影响，以及在27°C与18°C下的浓度–反应曲线比较。Icilin能显著激活TRPM8通道外向电流，表现出浓度依赖性。当温度从27°C降低至18°C时，EC₅₀值下降（从–6.72→–7.45），说明激活效力增强。温度降低强化Icilin的作用，进一步证明TRPM8的活化对温度高度敏感。Icilin是比薄荷醇更强的TRPM8激动剂，此实验验证其温度增强效应，为后续研究温度与化学配体的协同门控机制提供证据。这也说明自动膜片钳系统能精确捕捉细微温度变化对通道活性的调制。

图4：Capsazepine对TRPM8通道的阻断作用

该图展示了在QPatch系统上，Capsazepine（TRPM8拮抗剂）对已被100µM(–)-薄荷醇激活的外向电流的抑制作用。通过比较不同浓度下的电流响应与浓度–反应曲线，分析其抑制效应及温度影响。Capsazepine能有效、浓度依赖性地抑制TRPM8通道外向电流。在27°C与18°C下抑制效力差异不显著，表明其作用几乎不受温度影响。与文献报道的IC₅₀值一致（见Table 2），验证实验结果的可靠性。

表2：Capsazepine阻断TRPM8的logIC₅₀值

Capsazepine的IC₅₀在两种温度下差异不大，验证了其阻断作用不依赖温度变化。所有系统间的数据变化范围一致，表明Sophion自动膜片钳平台可实现高重复性与跨系统一致性。

总结

研究结果表明，利用HEK293细胞在Sophion自动膜片钳平台上可以稳定、可重复地检测TRPM8电流。该体系对药物和温度变化均有一致响应，所得EC₅₀与IC₅₀值与文献结果相符。总体而言，Sophion的中、高通量膜片钳系统适用于TRPM8通道的药理研究及药物筛选。

若你的项目聚焦于温度感受、冷性痛觉过敏或TRPM8相关疾病（如某些癌症、眼科或膀胱疾病），该检测体系可为你提供：

•已验证的自动膜片钳工作流程

•模拟生理冷敏反应的温度控制激活模式

•兼顾精细药理分析与高通量筛选的多层次实验通道

该TRPM8检测方案不仅重现生理学温度敏感特性，更为离子通道药物开发提供了标准化、可转移的实验平台。Sophion自动膜片钳系统，让TRPM8研究更高效、更精准。